ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

КОРМОГРИЗИН

ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ

ГОСТ 27786-88 (СТ СЭВ 5896-87)

Издание официальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ Москва

УДК 636.085:006.354    Группа    С05

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ОКП 92 9121

Срок действия с 01.01.89 до 01.01.94

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на кормогризин — препарат, состоящий из антибиотика гризина, получаемый путем микробиологического синтеза с использованием культуры Act. griseus и наполнителей и предназначенный для использования при выращивании и откорме сельскохозяйственных животных.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1.    Кормогризин должен изготовляться в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическому регламенту, утвержденному в установленном порядке.

1.2.    Характеристики

1.2.1.    Кормогризин изготовляют с наполнителем. В качестве наполнителя используют кукурузную или пшеничную муку, пшеничные или ржаные отруби.

Наполнитель по крупности и влажности должен соответствовать значениям, установленным для кормогризина.

1.2.2.    В зависимости от содержания активного действующего начала — антибиотика гризина — кормогризин изготовляют двух марок: кормогризин-10 и кормогризин-40.

1.2.3.    По физико-биологическим показателям кормогризин должен соответствовать требованиям, указанным в таблице.

Перепечатка воспрещена

© Издательство стандартов, 1988

Безвредность в тест-дозе на одну мышь, мг Зараженность вредителями и плесенью Значение для марки Наименование показателя Кормогризин-Ю Кормогризин-40 Внешний вид Массовая доля влаги, %, не более Крупность помола: остаток на сите с отверстиями диаметром 0,56 мм, %, не более остаток на сите с отверстиями диаметром 1,00 мм, %, не более Гризин в 1 кг препарата, г Подлинность Однородный порошок от светло-желтого до светло-коричневого цвета Массовая доля поваренной соли, %, не более

9,5 10,а 0,5 10± 1,0    |    40±4,0 Появление нингидриноокрашенных компонентов на хроматограмме, совпадающих по положению с нингидрино-окрашенными компонентами стандартного образца гризина, а также зон задержки тест-культуры от испытуемых компонентов пробы 100 Не допускается 15

---

1.3. Требования безопасности

1.3.1.    Препарат кормогризина изготовляют в соответствии с правилами безопасности для производства микробиологической промышленности, утвержденными Госгортехнадзором СССР.

1.3.2.    Предельно допускаемая концентрация препарата в воздухе рабочих помещений не должна превышать 0,4 мг/м³.

1.3.3.    При работе с препаратом необходимо применять индивидуальные средства защиты: рес.пиратор, защитные очки, резиновые перчатки, также соблюдать меры личной гигиены.

1.3.4.    Производственное оборудование должно отвечать требованиям ГОСТ 12.2.003-74.

1.3.5.    Для предупреждения опасного и вредного воздействия микроорганизмов следует соблюдать требования биологической безопасности по ГОСТ 12.1.008-76.

1.3.6.    Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны — по ГОСТ 12.1.005-76.

1.4. Маркировка

1.4.1. На каждый бумажный мешок наносят транспортную маркировку по ГОСТ 14192-77 с изображением манипуляционных знаков «Боится сырости», «Боится нагрева», «Крюками непосредственно не брать» и с указанием дополнительных сведений:

ГОСТ 27786-88 С. 3

1)    наименования ведомства;

2)    наименования предприятия-изготовителя и (или) его товарного знака;

3)    наименования и марки препарата;

4)    массы нетто;

5)    номера партии;

6)    даты изготовления препарата;

7)    гарантийного срока хранения;

8)    условий хранения;

9)    предупредительных надписей «Хранить с предосторожностью. Список Б». «Для ветеринарии»;

10)    обозначения настоящего стандарта.

1.4.2. В каждый бумажный мешок вкладывают инструкцию по применению препарата в количестве, равном числу полиэтиленовых мешков.

1.5. Упаковка

1.5.1.    Кормогризин фасуют по 5, 10 и 20 кг в мешки из полиэтиленовой пленки по ГОСТ 10354-82 или мешки полиэтиленовые по ГОСТ 17811-78. Полиэтиленовые мешки термоспаивают и упаковывают в бумажные четырехслойные мешки по ГОСТ 2226—75.

Допускается фасовать кормогризин в бумажные мешки марок БМ, ВМ, ПМ, БМП, ВМБ, ВМП по ГОСТ 2226-75.

1.5.2.    Бумажные мешки зашивают машинным способом нитками по ГОСТ 14961-85, или по ГОСТ 6309-87, или шпагатом по ГОСТ 17308-85, оставляя гребень по всей ширине мешка не менее 4 см.

Допускается вместо зашивания бумажных мешков их склеивание по ГОСТ 18251-87.

1.5.3.    Масса нетто упаковочной единицы должна составлять. (20 ±0,2) кг.

2. ПРИЕМКА

2.1. Кормогризин принимают партиями. Партией считают любое количество препарата, изготовленное за один технологический цикл, однородное по показателям качества и оформленное одним документом о качестве.

В документе о качестве указывают:

1)    наименование организации, в систему которой входит предприятие-изготовитель;

2)    наименование предприятия-изготовителя и (или) его товарный знак;

3)    наименование и марку препарата;

4)    номер партии;

5)    массу нетто партии;

6)    количество мест в партии;

7)    дату изготовления препарата (год, месяц, число);

8)    результаты испытаний; дату выдачи документа о качестве;

9)    гарантийный срок и условия хранения;

10)    обозначение настоящего стандарта.

2.2.    Для проверки качества кормогризина от каждой партии отбирают выборку в размере: от партии до 100 упаковочных единиц— не менее 5 упаковочных единиц; свыше 100 упаковочных единиц —5%.

2.3.    Подлинность кормогризина определяют в каждой 10-й партии. При изменении технологии изготовления кормогризина, подлинность определяют в пяти партиях подряд.

2.4.    При неудовлетворительных результатах испытаний хотя бы по одному показателю по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве выборки, взятой от той же партии продукции.

Результаты испытаний распространяют на всю партию.

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

3.1.    Отбор проб

3.1.1.    От каждой упаковочной единицы отбирают 2—3 точечные пробы щупом вместимостью не более 50 г, погружая его на всю глубину мешка.

3.1.2.    Точечные пробы объединяют, тщательно перемешивают и выделяют среднюю пробу массой не менее 600 г.

3.1.3.    Среднюю пробу делят пополам и помещают в две чистые сухие банки с притертыми пробками или в полиэтиленовые мешочки.

Одну банку или мешочек передают в лабораторию для анализа качества препарата, а другую банку или мешочек хранят в течение срока годности препарата на случай разногласий в оценке качества.

3.1.4.    Пробы, направляемые в лабораторию или на хранение, опечатывают и снабжают этикеткой с указанием:

1)    наименования предприятия-изготовителя и (или) его товарного знака;

2)    наименования препарата;

3)    номера партии;

4)    массы нетто партии;

5)    даты отбора пробы;

6)    должности и подписи лица, отбиравшего пробу;

7)    гарантийного срока хранения.

ГОСТ 27786-88 С б

3.2.    Определение внешнего вида и плесени

Навеску массой 50 г рассыпают на белую чистую поверхность,

рассматривают и определяют цвет и наличие плесени при естественном освещении.

3.3.    Определение массовой доли влаги

Сущность метода заключается в высушивании препарата при

нагревании до постоянной массы при температуре (105±2)°С и определении влаги по разности результатов взвешиваний.

3.3.1.    Аппаратура и реактивы

Сушильный шкаф любого типа, обеспечивающий температуру нагрева от 100 до 200°С с точностью терморегуляции ±2°С.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80 1-го и 2-го классов точности с пределом взвешивания 200 г.

Бюксы, изготовленные из некоррозируемого металла, или стаканчики СВ 14/8; 19/9; 24/10; 34—2 по ГОСТ 25336-82.

Эксикатор исполнения 2 с диаметром корпуса 100, 140, 190, 250 мм по ГОСТ 25336-82, содержащий силикагель с добавлением индикатора влажности или прокаленный хлорид кальция.

3.3.2.    Проведение испытания

Открытую бюксу и крышку помещают в сушильный шкаф при температуре (105±2)°С на 30 мин. Затем закрывают бюксу крышкой, охлаждают в эксикаторе до комнатной температуры и взвешивают. Высушивание бюксы с крышкой проводят до достижения постоянной массы.

5 г препарата помещают в бюксу. Открытую бюксу и крышку помещают в сушильный шкаф при температуре (105±2)°С на 4 ч, затем закрывают бюксу крышкой, переносят в эксикатор, охлаждают до комнатной температуры и быстро взвешивают.

Вновь высушивают образец в течение 1 ч, охлаждают и взвешивают. Повторяют высушивание до тех пор, пока разность результатов двух последовательных взвешиваний будет не более 0,0004 г. Если после повторного высушивания масса увеличится, за результат принимают наименьшее значение.

3.3.3.    Обработка результатов

Массовую долю влаги (Xi) в процентах вычисляют по формуле

_{х =} пц-щ 100,

Щ—т₃

где т 1 — масса бюксы с пробой до высушивания, г; т₂ — масса бюксы с пробой после высушивания, г; т₃ — масса бюксы, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения не должны отличаться от среднего значения более чем на 5% (отн.).

3.4.    О п р е д е л е н и е крупности помола

Сущность метода заключается в гравиметрическом определении остатка на сите после просеивания пробы.

3.4.1.    Аппаратура

Установка для рассева с ситами: с номинальными размерами ячейки 0,560 мм и 1,00 мм по ГОСТ 4601-73.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80 1-го и 2-го классов точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

3.4.2.    Проведение испытаний

100 г препарата помещают на сито, которое закрывают крышкой, укрепляют на платформе установки для рассева, включают установку и просеивают в течение 10 мин при 190—210 колебаниях в минуту.

Допускается просеивание ручным способом при ПО—120 колебаниях в минуту и размахе колебаний около 10 см.

3.4.3.    Обработка результатов

Остаток на сите (Х₂) в процентах вычисляют по формуле *2=—^-100,

где т₄ — масса остатка на сите, г;

т₅ — масса пробы, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения не должны отличаться от среднего значения более чем на 10% отн.

3.5.    Определение гризина

Сущность метода заключается в сравнении зон задержки роста тест-культуры Вас. subtilis 6633 испытуемым препаратом и стандартом гризина. Чувствительность метода 0,5 ЕД в 1 мг.

3.5.1. Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды

pH-метр с погрешностью измерения не более 0,1.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80 1-го и 2-го классов точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Автоклав вертикальный по ГОСТ 9586-75.

Микроскоп по ГОСТ 8284-78.

Термостат любого типа, обеспечивающий температуру нагрева (37 ± 1)^аС.

Ватерпас.

Столик с горизонтальной пластиной вертикального стекла.

Фотоувеличитель.

Сушильный шкаф любого типа, обеспечивающий температуру нагрева от 100 до 200°С с погрешностью терморегуляции ±2°С.

ГОСТ 27786-88 С. 7

Термометр с ценой деления PC и диапазоном измерения от О до 100°С.

Баня водяная любого типа, обеспечивающая температуру нагрева от 20 до 100°С с погрешностью терморегуляции ±3°С.

Бур или пробочное сверло с внутренним диапазоном 8 мм.

Капельницу, представляющую собой инъекционную иглу, впаянную в стеклянную трубку диаметром 5—7 мм, на конец которой одета резиновая груша.

Колбы мерные вместимостью 100, 1000 см³ по ГОСТ 1770-74.

Колбы конические вместимостью 100 см³ по ГОСТ 25336-82.

Чашки бактериологические (чашки Петри) типа ЦБН исполнения 2, номинальным диаметром 100 мм по ГОСТ 25336-82.

Пипетки вместимостью 5, 10 и 20 см³ исполнения 6, 7 по ГОСТ 20292-74.

Пробирки типа Ш диаметром 16 мм, высотой 150 мм из химически стойкого стекла группы ХС по ГОСТ 25336-82.

Спиртовки стеклянные по ГОСТ 25336-82.

Матрацы стеклянные.

Воронка типа В диаметром 100 мм высотой 150 мм по ГОСТ 25336-82.

Петля микробиологическая.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76.

Образец стандартный стеклянный для визуального определения мутности бактериальных взвесей, мутность которого равна 1,66 см^-1 и эквивалента 10 международным единицам мутности.

Цилиндры мерные вместимостью 50 см³ по ГОСТ 1770-74.

Гризина сульфат стандартный с активностью, указанной на этикетке.

Тест-микроорганизм Вас. subtilis 6633.

Натрий лимоннокислый трехзамещенный по ГОСТ 22280-76.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233-77.

Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, растворы концентрации 0,01 моль/дм³ (0,01 н.) и 0,2 моль/дм³ (0,2 н.).

Кальций фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198-75.

Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по ГОСТ 13805-76.

Бульон Хоттингера.

Агар микробиологический по ГОСТ 17206-84 или агар пищевой по ГОСТ 16280-70.

Раствор буферный лимоннокислый с pH 3—3,2; готовят смешением двух растворов: 62 см³ раствора А и 100 см³ раствора Б.

Растворы А и Б готовят следующим образом:

раствор А — 22,6 г цитрата дигидрата натрия помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см³ и доливают воду до метки;

раствор Б—8,2 см³ концентрированной соляной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см³ и разбавляют водой до метки.

Растворы для окраски по Граму.

Вода мясная по ГОСТ 20729-75.

Бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 20730-75.

Среда агаровая голодная; готовят следующим образом:

15 г агара, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г, помещают в колбу вместимостью 1000 см³, содержащую 900 см³ воды. Колбу ставят на водяную баню и нагревают до полного расплавления агара. 3 г дигидроортофосфата калия, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г, растворяют в 100 см³ воды, затем выливают в расплавленный агар, доводят объем водой до 1000 см³ и перемешивают. Устанавливают pH 8,0 при помощи 30%-ного раствора гидрооксида натрия. Агаровую среду кипятят до образования осадка, затем фильтруют через толстый слой ваты и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при температуре (110±1)°С. pH среды поля стерилизации должна быть 7,8—8,0. Среду хранят при температуре 20—22°С не более двух месяцев.

Среда агаровая питательная; готовят аналогично приготовлению агаровой голодной среды, при этом взамен воды берут МПБ с содержанием аминного азота 50—60 мг в 100 см³ бульона. Питательную среду стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при температуре (110±1)°С. После стерилизации pH раствора должна быть 7,8—8,0. Раствор хранят в течение месяца при комнатной температуре.

Раствор физиологический.

Агар мясо-пептонный (МПА)—среда для культуры Вас. subtilis 6633; готовят следующим образом: МПБ разбавляют водой в соотношении 1:2. К 1000 см³ разбавленного МПБ добавляют 20 г агара, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г. Для набухания агара смесь выдерживают в течение 40—60 мин при комнатной температуре.

МПА расплавляют на водяной бане, устанавливают pH 7,2—7,4 при помощи 30%-ного раствора гидрооксида натрия, дают среде отстояться в течение 30 мин, после чего среду фильтруют через толстый слой ваты, затем разливают в колбы и стерилизуют при температуре (110±1)°С в течение 30 мин. pH среды после стерилизации должен быть 7,2—7,4.

Среда для выращивания спор Вас. subtilis 6633 в матрицах; готовят следующим образом: 25 г агара, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г, добавляют на 1000 см³ бульона Хоттингера с содержанием 30—35% аминного азота. Полученную среду разливают по матрицам и стерилизуют в течение 30 мин при температуре (110±1)°С. pH после стерилизации должен быть 6.0—6,2.

ГОСТ 27786-88 С 9

Суспензия тест-культуры Вас. subtilis 6633 готовят следующим образом: тест-культуру Вас. subtilis 6633 переносят микробиологической петлей в пробирку с физиологическим раствором, затем пипеткой каплю полученной суспензии переносят в чашки Петри со средой МПА, растирают ее по чашке стеклянным шпателем, после чего этим же шпателем переносят оставшуюся на нем культуру из чашки в чашку с вышеуказанной средой путем растирания (5—7 чашек), добиваясь таким образом в последующем роста отдельных характерных колоний.

Тест-культуру выращивают при температуре 37°С в течение 18—24 ч. Затем отбирают типичные колонии — мелкие, сероватые с зубчатым краем и пересевают бактериальной петлей на скошенный МПА в пробирку и выращивают при температуре 37°С в течение 18 ч, после чего культуру со скошенного агара смывают 5—10 см³ стерильной дистиллированной воды и смыв переносят в матрацы. Засеянный матрац выдерживают при температуре 37°С в течение 5—7 сут, после чего производят микроскопический контроль и, если в мазках, окрашенных по Граму, имеется в поле зрения 80—90% спор, делают смыв культуры стерильной дистиллированной водой.

Полученную взвесь спор прогревают при температуре 60—70^СС на водяной бане в течение 30 мин, затем взвесь спор промывают не менее трех раз стерильной дистиллированной водой при центрифугировании до полной прозрачности надосадочной жидкости. Промытую взвесь спор хранят в стерильной дистиллированной воде в запаянных ампулах или пробирках в течение двух лет при температуре от 4 до 10°С.

Гризина основной стандартный раствор концентрации 1000 ЕД в 1 см³; раствор готовят следующим образом: 20 мг стандартного образца гризина, взвешенные с погрешностью не более 0,0002 г, растворяют в рассчитанном объеме раствора соляной кислоты концентрации 0,01 моль/дм³.

Объем раствора соляной кислоты (А₃) в кубических сантиметрах вычисляют по формуле

у щ-А ^3_ 1000 ’

где те — масса стандартного образца сульфата гризина, мг;

А — активность стандартного образца сульфата гризина, ЕД в 1 мг (весовое выражение 1 ЕД активности сульфата гризина зависит от активности действующего в настоящее время стандартного образца);

1000— активность основного стандартного раствора сульфата гризина, ЕД в 1 см³.