МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МЯСО И ПРОДУКТЫ МЯСНЫЕ
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКСИПРОЛИПА
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МЯСО И ПРОДУКТЫ МЯСНЫЕ Метол определения оксипролина
Meal and meal products. Method for determination of oxyproline
МКС 67.120.10 ОКСТУ 9209
Дата введения 01.01.79
Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты и устанавливает метод определения оксипролина. когда определение этого показателя предусмотрено нормативно-технической документацией.
Метод основан на выделении оксипролина при кислотном гидролизе пробы продукта, проведении цветной реакции с продуктами окисления ее и измерении интенсивности развивающейся окраски.
(Измененная редакция. Изм. № 3).
1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
1.1. Пробу отбирают по ГОСТ 9792*. пропускают через мясорубку не менее двух раз до тонкою измельчения и тщательно перемешивают.
1.2. Пробу, подготовленную для испытания, помещают в стеклянную банку вместимостью от 200 до 400 см1, заполнив ее. и закрывают крышкой.
Пробу хранят при температуре от 3 до 5 *С.
Испытания проводят в течение 24 ч.
2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469 с отверстием решетки диаметром от 3 до 4 мм.
Весы лабораторные общею назначения второю класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г с допускаемой погрешностью взвешивания ± 0.001 г по ГОСТ 24104**.
Баня водяная.
Баня песчаная.
Электрона|ревательное устройство с песчаной баней.
Колориметр фотоэлектрический лабораторный по нормативно-технической документации с устройством для отсчитывания значения оптической плотности и интерференционным фильтром с Хпых - (558 ± 2) нм. (рабочая длина кювет 30—50 мм. светофильтр — зеленый) или спектрофотометр для измерения в видимой области спектра.
Колба Кн-1-250-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.
Дефлегматоры 250—29/32 ТС или холодильники ХШ-1—300—29/32 ХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 1-100-2 или 2-100-2; 1-250-2 или 2-250-2; 2-IOOO-2 по ГОСТ 1770, вымеренные на наливной объем.
• На территории Российской Федерации дополнительно действует ГОСТ Р 51447-99. '• С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104 — 2001.
Перепечатка воспрещена
© Издательстве) стандартов, 1978 © СТАНДАРТИНФОРМ. 2010
С. 2 ГОСТ 23041-78
Воронки В-36-50 ХС по ГОСТ 25336.
Пробирки П4—10—14/23 по ГОСТ 25336.
Пробирки дни колориметрирования должны быть из бесцветного стекла.
Пипетки 5—1—2 или 4—2—2; 7—1—5 или 7—2—5; 7—1 — 10 или 7—2—10.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026 или фильтры обезболенные диаметром 5 и 9 см.
Фольга алюминиевая по ГОСТ 745.
Бумага индикаторная универсальная.
Хлорамин — Т.
Хлорамин — Б.
Кислота соляная по ГОСТ 3118. х. ч.. плотностью 1.19 г/см3 и раствор с (НС1) = 6 моль/дм3.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328. х. ч. или ч. д. а., гранулированная, раствор с (NaOH) = = 10 моль/дм3.
Спирт пропилоный (иротанол), ч. и х. ч.
Спирт изопропиловый, ч. или ос. ч.
Кислота лимонная по ГОСТ 3652. х. ч.
Кислота уксусная по ГОСТ 61.x. ч.
Натрий уксуснокислый по ГОСТ 199. х. ч.
Парадиметил аминобензальдегид.
Кислота хлорная, х. ч.. плотностью 1.50 г/см3, массовая доля кислоты 57 % или ч. д. а., плотностью 1.32 г/см3, массовая доля кислоты 42 %.
Вода дисти/тлированная по ГОСТ 6709.
Оксипролин.
Раза. 2. (Измененная редакция. Изм. N° 3).
3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
3.1. Приготовление реактивов
3.1.1. Приготовление реактива для окисления
1.41 г хлорамина-Т или хлорамина-Б разводят в 10 см3 воды и последовательно добавляют 10 см3 пропилового спирта и 80 см1 буферного раствора. Раствор должен быть свежеприготовленный.
3.1.2. Приготовление цветного реактива
10 г нарадиметиламинобензальдегида растворяют в 35 см3 хлорной кислоты, непрерывно перемешивая. Полученный раствор смешивают с 65 см3 пропилового спирта. Раствор приготовляют в день использования.
3.1.3. Приготовление буферного раствора (pH 6.0)
50 г лимонной кислоты, 12 см3 уксусной кислоты (96 г на 100 см3). 120 г уксуснокислого натрия. 34 г гидроокиси натрия растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см3, доводят до метки дистиллированной водой. Полученный раствор смешивают с 200 см3 воды и 300 см3 пропилового спирта.
3.1.4. Приготовление основного раствора оксипролина
100 мг стандартного препарата оксипролина растворяют в воде (в мерной колбе вместимостью 100 см3), добавляют каплю 6 моль/дм3 (н.) соляной кислоты и доводят водой до метки. В день использования берут 1 см3 основного раствора в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят до метки водой, тщательно перемешивая. 1 см3 этого раствора содержит 0.01 мг оксипролина. Затем приготовляют четыре стандартных раствора путем разбавления 5. 10. 20 и 30 см3 этого раствор;» водой в мерных колбах вместимостью 100 см3 для получения соответственно концентраций 0.5; 1; 2 и 3 мкг/см3.
(Измененная редакция. Изм. N° 1).
3.2. Построение градуировочного графика
Измеряют оптическую плотность стандартных растворов оксипролина придание волны 558 нм. Повторяют всю операцию определения, используя по 4 см3 четырех разбавленных стандартных растворов оксипролина.
По полученным средним данным строят |радуировочный график, откладывая на оси ординат величины оптической плотности, а на оси абсцисс — концентрацию оксипролина. по отмеченным точкам проводят прямую линию.
50
ГОСТ 23041-78 С. 3
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
4.1. В коническую колбу вместимостью 300 см3 помещают около 4 г продукта, взвешенного с ио1решностью не более 0.0002 г. Добавляют 100 ем' 6 моль/дм3 (н.) раствора соляной кислоты и кипятильные камни для равномерного кипения. Колбу соединяют с воздушным или водяным холодильником и нагревают на песчаной бане в течение 7 ч при пиролизе проб вареных и полукопченых мясных продуктов, в течение 8ч — при пиролизе проб мяса и сырокопченых мясных продуктов.
Теплый гидролизат фильтруют в мерную колбу вместимостью 250 см3, смывая пиролизную колбу и фильтр дистиллированной водой. Объем колбы доводят водой до метки и тщательно перемешивают. Затем разбавляют пиролизат, доводя содержание оксипролина в 1 см3 до 1—4 мкг. Для этого 4—10 см3 гидролизата (в зависимости от предполагаемого содержания оксипролина в испытуемом продукте) вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и нейтрализуют 10 моль/дм3 (н.) раствором гидроокиси натрия до pH 6.0 по индикаторной бумаге.
Объем доводят водой до метки и перемешивают. Переносят 4 см3 этого раствора в пробирку и добавляют 2 см3 реактива для окисления, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Затем добавляют 2 см3 цветного реактива, перемешивают и пробирку закрывают алюминиевой фольгой. Одновременно готовят два контрольных раствора, используя вместо фильтрата дистиллированную воду. Пробирки быстро переносят в водяную баню с температурой (60 ± 0.5) *С и назревают в течение 15 мин. затем пробирки охлаждают в течение 3 мин водой или льдом и нс позднее чем через 30 мин измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 558 нм. Предварительно измеряют оптическую плотность контрольных растворов одного относительно другого, а затем испытуемых в отношении контрольного.
(Измененная редакция, Изм. № 1).
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Массовую долю оксипролина (Л) вычисляют в процентах по формуле
у С 250 100 100 шПО6
где С — количество оксипролина. найденное по градуировочному графику, мкг/см3; т — количество продукта, взятое для испытания, г;
V — количество гидролизата, взятое для нейтрализации, см3;
106 — коэффициент пересчета в мкг;
100 — коэффициент пересчета в проценты.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение двух па-раллельных определений, расхождение между которыми не должно превышать 0.5 %.
Окончательный результат вычисляют с по|решностъю до 0.1 %.
51
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Министерством мясной и молочной промышленности СССР
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 30.03.78 № 893
3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
5. Снято ограничение срока действия по протоколу № 3—93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6—93)
6. ИЗДАНИЕ (январь 2010 г.) с Изменениями № I, 2, 3, утвержденными в августе 1983 г., июне 1985 г., декабре 1987 г. (ИУС 12-83, 10-85, 4-88)
52
