Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на прополис и устанавливает метод определения минимальной подавляющей концентрации водно-спиртового экстракта прополиса в диапазоне от 100 до 600 мкг/см куб. для характеристики его антимикробной активности

Отменён

Отменен, с 15.02.2015 пользоваться ГОСТ 31772-2012

Действие завершено 15.02.2015

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

4 Отбор и подготовка пробы

5 Требования безопасности проведения работ

6 Средства измерения. Вспомогательное оборудование, реактивы, материалы

7 Подготовка к испытаниям

8 Проведение испытания

9 Обработка и представление результатов

10 Характеристика погрешности испытания

11 Оформление результатов испытаний

Библиография

Показать даты введения Admin

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСТР

53124

2008

ПРОПОЛИС

Антимикробная активность

Издание официальное

О

Й

со

о

о

сч

I

N

со

ш


Москва

Стандартинформ

2009

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Обществом с ограниченной ответственностью «Центр исследований и сертификации «Федерал» и Государственным научным учреждением Научно-исследовательским институтом пчеловодства Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИП Россельхозакадемии)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 432 «Пчеловодство»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 декабря 2008 г. № 544-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты»,атекст изменений ипоправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ, 2009

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОПОЛИС Антимикробная активность

Propolis. Antimicrobial activity

Дата введения — 2010—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на прополис и устанавливает метод определения минимальной подавляющей концентрации водно-спиртового экстракта прополиса (в пересчете на сухой экстракт) в диапазоне измерений от 100 до 600 мкг/см3 для характеристики его антимикробной активности. Требования к контролируемому показателю установлены в ГОСТ 28886.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025—2006 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ Р 51446-99 Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований

ГОСТР51652—2000 Спиртэтиловыйректификованныйизпищевогосырья.Техническиеусловия ГОСТ Р 52001-2002 Пчеловодство. Термины и определения

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 28886-90 Прополис. Технические условия

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году.

Издание официальное

Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52001, ГОСТ Р ИСО 5725-1, а также следующий термин с соответствующим определением:

3.1    минимальная подавляющая концентрация; МПК (minimal inhibitory concentration): Минимальная концентрация антимикробного агента в среде культивирования, вызывающая полное подавление видимого невооруженным глазом роста микроорганизма.

4    Отбор и подготовка пробы

Отбор и подготовка пробы — по ГОСТ 28886 (пункт 3.1.1).

5    Требования безопасности проведения работ

При проведении испытаний необходимо соблюдать требования безопасности при работе с микроорганизмами III — IV групп патогенности в соответствии с [1].

6    Средства измерения, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы

6.1    Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более + 0,001 г по ГОСТ 24104.

6.2    Термометр жидкостный стеклянный с допускаемой погрешностью + 1 °С в диапазоне измерения от 0 °С до 70 °С по ГОСТ 28498.

6.3    Часы механические по ГОСТ 3145.

6.4    Дозатор ручной пипеточный одноканальный по [2] с диапазоном объемов дозирования от 0,02 до 0,2 см3.

6.5    Цилиндры 3-10-2, 3-100-2, 3-1000-2 по ГОСТ 1770.

6.6    Пипетки вместимостью 5 см3 по ГОСТ 29227.

6.7    Термостат для культивирования микроорганизмов при температуре (36 + 1) °С.

6.8    Аппарат для встряхивания жидкости в колбах и пробиркахс диапазоном частот колебаний штатива от 100 до 150 колебаний в минуту, амплитудой колебаний (25 + 5) мм.

6.9    Роторный испаритель.

6.10    Баня водяная с терморегулятором с диапазоном поддерживаемой температуры от 40 °С до 55 °С и точностью регулировки температуры + 2 °С.

6.11    Колбы Кн-1-250-29/32, К-1-10-14/23 по ГОСТ25336.

6.12    Воронка лабораторная В-75-110ХС по ГОСТ 25336.

6.13    Пробирки П1-21-200 по ГОСТ 25336.

6.14    Чашки Петри по ГОСТ 25336, номинальным диаметром 100 мм или чашки одноразовые стерильные из полимерных материалов номинальным диаметром от 90 до 100 мм.

6.15    Шпатели бактериологические стеклянные или стерильные из полимерных материалов.

6.16    Фильтры обеззоленные (синяя лента).

6.17    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

6.18    Спирт этиловый по ГОСТ Р 51652.

6.19    Агар питательный сухой.

6.20    Агар Мюллера-Хинтона сухой.

6.21    Физиологический раствор по ГОСТ 10444.1 (подраздел 4.29).

6.22    Культура Staphylococcus aureus, штамм 209p (FDA209p, АтСс 6538P).

6.23    Стандарт мутности 1,0 по MacFarland или стандартный образец мутности бактерийных взвесей БАК-10 с аттестованным значением оптической плотности (0,36 + 0,01) ед. оптической плотности.

6.24    Вспомогательное оборудование для проведения микробиологических исследований, измерительное оборудование и тесты для контроля качества проведения микробиологических исследований по ГОСТ Р 51446.

Допускается использование других средств измерений с метрологическими характеристиками, вспомогательного оборудования и материалов с характеристиками, реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

7    Подготовка к испытаниям

7.1    Приготовление 70 %-ного водного раствора этилового спирта

В цилиндр вместимостью 1000 см3 по ГОСТ 1770 вносят 730 см3 этилового спирта по ГОСТ Р 51652 и доводят объем дистиллированной водой по ГОСТ 6709 до 1000 см3.

7.2    Приготовление водно-спиртового экстракта прополиса

В колбу вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336 вносят навеску прополиса (5,0 + 0,5) г и 100 см3 70%-ного водного раствора этилового спирта, приготовленного по 7.1, закрывают корковой пробкой и экстрагируют на аппарате для встряхивания по 6.8 при комнатной температуре в течение (24 + 1) ч. Содержимое колбы фильтруют через бумажный складчатый фильтр по 6.16. Экстракт прополиса (ЭП) хранят в темном месте при температуре не выше 25 °С.

7.3    Подготовка к микробиологическим исследованиям

Подготовку стерильной посуды и материалов, контроль работы испытательного оборудования, приготовление питательных сред и обеззараживание посевов тест-культуры проводят в соответствии с ГОСТ Р 51446 и инструкциями производителей.

7.4    Приготовление тест-культуры

Культуру Staphylococcus aureus по 6.22 выращивают в течение (24 + 2) ч на питательном агаре (см. 6.19) при температуре (36 + 1) °С. В физиологическом растворе по ГОСТ 10444.1 готовят суспензию клеток S. aureus, соответствующую 109 клеток/см3 по стандарту мутности (см. 6.23). Из исходной суспензии тремя 10-кратными разведениями в физиологическом растворе получают взвесь тест-культуры плотностью 106 клеток/см3.

8    Проведение испытания

8.1    Круглодонную колбу вместимостью 10 см3 по ГОСТ 25336 взвешивают с записью результата до третьего десятичного знака, пипеткой вместимостью 5 см3 по ГОСТ 29227 вносят 4 см3 ЭП, приготовленного по 7.2. Растворитель отгоняют на роторном испарителе при (45 + 2) °С до постоянного веса (разность между двумя последовательными взвешиваниями не превышает 0,001 г). Массу сухого экстракта рассчитывают как разность веса колбы с сухим экстрактом и пустой колбы.

8.2    В стерильные пробирки П2-21-200 по ГОСТ 25336 стерильным цилиндром вместимостью 10 см3 по ГОСТ 1770 наливают по 10 см3 расплавленного агара Мюллера-Хинтона (МХА), приготовленного по 7.3, и выдерживают на водяной бане по 6.10 при (52 + 2) °С для выравнивания температуры. В МХА дозатором по 6.4 вносят ЭП в объеме 0,02; 0,04; 0,06;...; 0,20 см3, перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри по 6.14.

В чашки с застывшей средой, содержащей ЭП, вносят по 0,1 см3 взвеси тест-культуры S. aureus, приготовленной по 7.3, и равномерно распределяют по поверхности среды стерильным шпателем по 6.15. Для контроля ростовых качеств среды и жизнеспособности тест-культуры производят посев на МХА без добавления ЭП; для проверки отсутствия подавления растворителем роста тест-культуры производят посев на МХА с добавлением 70 %-ного водного раствора этилового спирта в объеме, равном максимальному добавленному объему ЭП. Чашки с засеянной средой культивируют при (36 + 1) °С и через (24 + 1) ч учитывают наличие роста.

8.3    В случае, если рост тест-культуры наблюдается при всех концентрациях ЭП и значение МПК определить не удается, испытание по 8.2 повторяют, увеличивая количество вносимого в среду экстракта, но не более чем до 0,3 см3.

9    Обработка и представление результатов

9.1 Значение МПК прополиса в пересчете на сухой экстракт С, мкг/см3, рассчитывают по формуле

С = V • 10-1 • m • 4-1 • 106,    (1)

где V —минимальное количество экстракта прополиса, подавляющее рост тест-культуры на среде культивирования по 8.2, см3;

10-1 — объем среды культивирования, см3;

m — масса сухого экстракта прополиса, полученная по 8.1, г;

4-1 — объем Эп, высушенного по 8.1, см3;

106 — коэффициент для пересчета граммов в микрограммы.

Пример — Масса сухого экстракта, полученного по 8.1, составила 0,243 г. После культивирования по 8.2рост тест-культурыотсутствовал в чашкахсдобавлением водно-спиртового экстракта в объеме 0,06 см3 и более. Результат вычислений по формуле (1) составляет:

С, = 0,06 • 10Г1 • 0,243 • 4-1 • 106 = 364,5 (мкг/см3).

МПК прополиса в пересчете на сухой экстракт учитывают в виде «364,5 мкг/см3».

9.2 За результат испытаний принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений, полученных в условиях повторяемости, если абсолютное расхождение между ними не превышает предел повторяемости г по ГОСТ Р ИСО 5725-6. Значение предела повторяемости г приведено в таблице 1.

При превышении предела повторяемости г целесообразно произвести дополнительное определение МПК прополиса и получить еще один результат. Если при этом расхождение (Смакс- Смин) не превосходит результатов трех определений, принимают среднеарифметическое значение результатов трех определений. Значение критического диапазона CR0 95(3) приведено в таблице 1.

Таблица 1

Минимальная подавляющая концентрация С, мкг/см3

Предел повторяемости г,

мкг/см3

Критический диапазон при трех измерениях СК0 95 (3), мкг/см3

Предел воспроизводимости R, мкг/см3

От 100 до 600 вкпюч.

0,18 C

0,21 C

0,35 C

При невыполнении этого условия проводят повторные испытания.

9.3    Абсолютное расхождение между результатами испытаний, полученными в двух лабораториях в условиях воспроизводимости, не должно превышать предела воспроизводимости R по ГОСТ Р ИСО 5725-6. При выполнении этого условия приемлемы оба результата испытания, и в качестве окончательного результата может быть использовано их среднеарифметическое значение. Значение предела воспроизводимости R приведено в таблице 1.

9.4    Результат измерений, округленный до целого числа, в диапазоне измерений от 100 до 600 мкг/см3 в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

(C + А), мкг/см3, при Р = 0,95,

где C — среднеарифметическое значение результатов определений по 9.2, мкг/см3;

+ А — границы абсолютной погрешности результатов определений по разделу 10, мкг/см3.

В случае, если результат измерений превышает 600 мкг/см3, его представляют в виде «Более 600 мкг/см3».

10    Характеристика погрешности испытания

Границы абсолютной погрешности результатов испытаний, получаемых согласно данному методу, при доверительной вероятности P = 0,95, + А = + 0,25C.

11    Оформление результатов испытаний

Результаты испытаний оформляют записью и протоколом в соответствии с требованиями ГОСТ РИСО/МЭК 17025.

[1]    Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322—2008

[2]    ТУ 64-13329—81

Библиография

Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней

Дозаторы пипеточные


УДК 638.16:006.354    ОКС    65.140    С52

Ключевые слова: прополис, водно-спиртовый экстракт прополиса, антимикробная активность, минимальная подавляющая концентрация, агар Мюллера-Хинтона, тест-культура Staphylococcus aureus 209p

Редактор Л.В. Коретникова Технический редактор Н.С. Гришанова Корректор В.Е. Нестерова Компьютерная верстка И.А. Налейкиной

Сдано в набор 30.07.2009. Подписано в печать 10.08.2009. Формат 60 х 84^. Бумага офсетная. Гарнитура Ариал. Печать офсетная. Усп. печ. л. 0,93. Уч.-изд. л. 0,60. Тираж 218 экз. Зак. 503.

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ruinfo@gostinfo.ru Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.

Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.