ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
СОКИ ФРУКТОВЫЕ
Метод определения содержания винной кислоты с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии
Издание официальное
ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овоще-сушильной промышленности (ВНИИКОП)
ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 «Продукты переработки плодов и овощей»
2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 583-ст
3 Стандарт гармонизирован с европейским стандартом ЕН 12137:1997 «Соки фруктовые и овощные. Определение винной кислоты в виноградном соке. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии»
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России
II 144
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
СОКИ ФРУКТОВЫЕ
Метол определения содержания винной кислоты С помощью высокоэффективной жидкое той хроматографии
Fruit juices. Method for determination of tartaric acid content using high performance liquid chromatography
Дата Ш1СЛСНИЯ 2001—01—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на виноградный сок и подобные ему продукты, содержащие виноградный сок, и устанавливает метод определения содержания (массовой концентрации или массовой доли) винной кислоты с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Диапазон определения массовой концентрации (массовой доли) винной кислоты — от 1,0 до 10,0 г/дм3 (г/кг).
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 5817-77 Кислота винная. Технические условия
ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора
проб
ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастягельные. Подготовка проб для лабораторных анализов
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования
ГОСТ Р 51431-99 Соки фруктовые и овощные. Метод определения относительной плотности
ИСО 3696—87** Вода для лабораторного анализа. Технические условия и методы испытаний
3 Сущность метода
Метод основан на определении массовой концентрации или массовой доли винной кислоты в виноградном соке с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением ионоэксклюзивной колонки и спектрофотометрического детектора в ультрафиолетовой области спектра.
4 Средства измерений, лабораторное оборудование, реактивы и материалы
Весы лабораторные общего назначения но ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г. 2-го класса точности.
• С 1 июля 2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001.
** Действует до введения в действие ГОСТ Р. разработанного на основе стандарта ИСО.
Издание официальное
Весы лабораторные общего назначении по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 500 г, 4-го класса точности.
Жидкостный хроматограф, состоящий из:
- насоса высокого давления с верхним пределом давлении не менее 25 МПа и диапазоном регулировании подачи растворителя от 0,1 до 5 см5/мин;
- петлевого устройства ввода пробы с рабочим объемом петли от 0,010 до 0.020 см5;
- спектрофотометрнческого детектора с переменной длиной волны, позволяющего проводить измерение оптической плотности при длине волны 210 нм. снабженного проточной кварцевой кюветой вместимостью не более 0,01 см5, с относительной погрешностью измерения оптической плотности не более 2 %:
- регистрирующего устройства (самописца или интегратора), позволяющего проводить измерения при чувствительности 0,2 мВ/см с погрешностью записи в рабочих условиях не более 0.5 %;
- термостата колонок, пригодного для поддержания рабочей температуры 40 *С;
- колонки длиной 300 мм. внутренним диаметром 7,8 мм, заполненной ионоэксклюзивным сорбентом на основе сополимера стирола с дивинилбензолом с привитыми сульфогруипамн в водородной форме размером частиц 10 мкм;
- предколонки, заполненной катионитом в водородной форме.
Мнкроширнц вместимостью, обеспечивающей полное заполнение петли инжектора.
Колбы мерные по ГОСТ 1770 вместимостью 50. 100 и 500 см5.
Пипетки по ГОСТ 29227 типа 2, исполнения 1, 1-го класса точности вместимостью 10 и 25 см5.
Фильтры мембранные размером пор не более 0,5 мкм.
Кислота серная по ГОСТ 4204, х.ч.
Кислота винная по ГОСТ 5817, чл.а.
Вода для лабораторного анализа по ИСО 36%, категории I.
Допускается использование других средств измерений, лабораторного оборудования и реактивов, по метрологическим и техническим характеристикам не уступающих указанным выше.
5 Отбор и подготовка проб
5.1 Отбор проб — по ГОСТ 26313.
5.2 Подготовка проб к испытаниям — но ГОСТ 26671.
Концентрированные продукты разводят водой до заданного значения относительной плотности в соответствии с нормативным или техническим документом на конкретный вид продукта. Относительную плотность разбаатенной пробы определяют по ГОСТ Р 51431 и найденное значение указывают в протоколе испытаний.
6 Подготовка к проведению испытаний
Для прнготоатсния растворов, используемых при проведении испытания, и подвижной фазы для ВЭЖХ используют только воду категории I по ИСО 3696.
6.1 Приготовление градуировочных расгнорон
Готовят серию градуировочных растворов винной кислоты в диапазоне массовых концентраций от 100 до 500 мг/дм5. Для этого навеску винной кислоты массой 50 мг переносят в мерную колбу вместимостью 100 см5, растворяют в небольшом количестве воды, объем содержимого в колбе доводят водой до метки. Получают градуировочный раствор винной кислоты массовой концентрации 500 мг/дм5. Остальные градуировочные растворы готовят точным разведением первого раствора в соответствующее количество раз.
7 Проведение испытаний
7.1 Приготовление рас шора пробы для хрочамирафичесми о анализа
Проводят два параллельных определения.
Пробу объемом 25 — 50 см5 (25 — 50 г) помещают в мерную колбу вместимостью 500 см5, добавляют около 300 см5 горячей воды температурой 80 — 85 ’С. тщательно перемешивают и оставляют для охлаждения до комнатной температуры, после чего объем содержимого в колбе доводят до отметки водой, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр. Фильтрат используют для хроматографического анализа.
7.2 Хроматографический анализ
Хроматографический анализ градуировочных растворов и растворов пробы, приготовленных по 7.1, проводят при следующих условиях:
2
ГОСТ Р 51428-99
- состав подвижной фазы— раствор серной кислоты c(H2S04) = 0.005 моль/дм3;
- скорость потока подвижной фазы— 0,6 см3/мин (для предотвращения чрезмерного давления скорость потока при кондиционирован ни колонки повышают постепенно, начиная с 0,2 см3/мин);
- длина волны детектора— 210 нм;
- температура колонки— 40 ‘С;
- объем анализируемого раствора— полное заполнение петли инжектора;
- длительность анализа— 20 мин;
- ориентировочное время удерживания винной кислоты— 10 мин.
Анализ градуировочных растворов проводят непосредственно перед анализом каждой серин растворов проб.
Регистрируют высоту пика винной кислоты.
8 Обработка и оформление результатов испытаний
По результатам анализа градуировочных растворов строят градуировочный график зависимости высоты пика винной кислоты от ее массовой концентрации.
По градуировочному графику определяют массовую концентрацию винной кислоты в растворе пробы, соответствующую высоте пика винной кислоты на хроматограмме раствора пробы. Массовую концентрацию винной кислоты в пробе лг,, г/дм3, вычисляют по формуле
*1 " -рг’* 10"3 , (I)
где с массовая концентрация винной кислоты в растворе пробы, определенная по градуировочному графику, мг/дм3;
У, — объем пригото&тенного по 7.1 раствора пробы, см3;
У2 — объем пробы, взятый для приготовления раствора пробы по 7.1, см3.
Массовую долю винной кислоты х2, r/кг, вычисляют по формуле
с V.
х2ш—I0-3. (2)
т
где т — масса навески пробы, взятой для приготовления раствора пробы по 7.1, г.
Вычисления проводят до второго десятичного знака.
Относительное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных одним оператором при анализе одной и той же пробы с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала времени, не должно превышать норматива оперативного контроля сходимости Ь % (Р= 0.95). При соблюдении этого условия за окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое результатов двух параллельных определений, округленное до первого десятичного знака.
Относительное расхождение между результатами двух определений, выполненных в двух лабораториях, не должно превышать норматив;! оперативного контроля воспроизводимости 15 % (Я- 0.95).
Пределы относительной погрешности определения массовой концентрации или массовой доли винной кислоты при соблюдении условий, регламентированных настоящим стандартом, не превышают ±10,5 % (Рш 0,95).
В протоколе испытаний указывают:
- информацию, необходимую для идентификации исследуемого продукта (вид продукта, происхождение. шифр);
- ссылку на настоящий стандарт;
- дату и способ отбора проб (по возможности);
- дату получения пробы для испытаний;
- дату проведения испытаний;
- результат испытаний с указанием погрешности и единицы измерений;
- соблюдение норматив;! контроля сходимости результатов;
- особенности проведения испытаний (разведение концентрированной пробы, относительную плотность разведенной пробы и пр.);
- отклонения условий проведения испытаний от описанных в стандарте, которые могли поатиять на результат испытаний.
147
ОКС 67.080 Н59 ОКСТУ 9109
Ключевые слова: виноградный сок, винная кислота, определение содержания, высокоэффективная жидкостная хроматография
148