ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ПРОПОЛИС

Метод определения флавоноидных соединений

Издание официальное

Москва Стандарти нформ 2014

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением «Научно-исследовательский институт пчеловодства» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИ пчеловодства Россельхо-

закадемии)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 432 «Пчеловодство»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. № 1580-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru)

© Стандартинформ, 2014

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОПОЛИС

Метод определения флавоноидных соединений

Propolis. Method for determination offlavonoid compositions

Дата введения — 2014—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на прополис и устанавливает метод определения флавоноидных соединений.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ Р 52001-2002 Пчеловодство. Термины и определения

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования.

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.103-83 Система стандартов безопасности труда. Одежда специальная защитная, средства индивидуальной защиты ног и рук. Классификация

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки ижарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28886-90 Прополис. Технические условия

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и

Издание официальное

по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте приведены термины по ГОСТ Р ИСО 5725-1, ГОСТ Р 52001.

4    Отбор и подготовка пробы

4.1    Отбор проб — по ГОСТ 28886 (подраздел 3.1).

4.2    Прополис в комках, брикетах измельчают. Анализируемую пробу прополиса тщательно перемешивают не менее 3 мин.

5    Сущность метода

Метод основан на спектрофотометрическом определении оптической плотности комплексов, образующихся при взаимодействии флавоноидов, входящих в состав продуктов пчеловодства, схпори-дом алюминия. В качестве стандарта служит рутин. Определение массовой доли суммы флавоноидов в продуктах пчеловодства в пересчете на рутин следует проводить в интервале длин волн 408—420 нм.

6    Требования безопасности проведения работ

6.1    При проведении измерений необходимо соблюдать требования электробезопасности при работе с приборами по ГОСТ Р 12.1.019.

6.2    Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения поГОСТ 12.4.009.

6.3    При выполнении анализов необходимо выполнять требования безопасности при работе с реактивами по ГОСТ 12.4.103.

6.4    К проведению анализов допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже среднего технического образования, владеющие навыками проведения анализов и изучившие инструкции по эксплуатации используемой аппаратуры.

7    Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

7.1    Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания+0,001 г по ГОСТ Р 53228.

7.2    Спектрофотометр, позволяющий проводить измерение оптической плотности при длине волны 390—420 нм.

7.3    Кюветы кварцевые с толщиной слоя раствора, поглощающего свет, равной 1 см.

7.4    Горелка газовая, электроплитка или колбонагреватель по ГОСТ 14919.

7.5    Колбы мерные наливные 2-25-1,2-50-1,2-100-1 по ГОСТ 1770.

7.6    Колбы конические Кн-1-100-14/23, Кн-1-250-14/23 по ГОСТ 25336.

7.7    Воронки В-36-60 или В-36-80 по ГОСТ25336.

7.8    Механические дозаторы 1-канальные с варьируемыми объемами дозирования 100-1000 мкп, 1—5 см³1-го класса точности.

7.9    Пипетки 2-1-1-1,2-2-25,2-2-5 по ГОСТ 29227.

7.10    Баня водяная лабораторная с электрическим или огневым подогревом.

7.11    Цилиндры мерные 1-100 поГОСТ 1770.

7.12    Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

7.13    Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652, с массовой долей 96 %.

7.14    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

7.15    Алюминий хлористый 6-водный [А1С1₃ • 6Н₂0], с содержанием основного вещества не ниже 99 %, Пика, каталожный номер 7784-13-6.

7.16    Рутин, ГСО.

2

ГОСТ Р 55312-2012

Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.

8    Подготовка к выполнению измерений

8.1    Приготовление 5 % раствора хлористого алюминия в 60 %-ном этаноле

В коническую колбу вместимостью 250 см³ по ГОСТ25336 взвешивают (5,000 ± 0,001) гхлористого алюминия, растворяют в (50,0 ± 0,5) г 60 %-ного этанола, массу раствора доводят до (100,00 ± 0,01) г 60 %-ным этанолом и тщательно перемешивают. Срок хранения раствора — не более одного года.

8.2    Приготовление раствора ГСО рутина

(0,050 ± 0,001) г ГСО рутина взвешивают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см³ по ГОСТ 1770, добавляют 40 см³ 60 %-ного этанола, нагревают до 50 °С—60 °С и выдерживают до полного растворения рутина. Затем охлаждают до комнатной температуры, доводят до метки 60 %-ным этанолом и тщательно перемешивают.

8.3    Построение калибровочного графика

В две мерные колбы вместимостью 25 см³ по ГОСТ 1770 дозатором вносят по 0,2 (0,4; 0,6; 0,8,1,0 и 1,2) см³ раствора рутина по 6.7.2.2 концентрацией 1 мг/см³; в одну колбу добавляют 4 см³ раствора хлористого алюминия по 6.7.2.1 (рабочий раствор), доводят до метки обе колбы 60 %-ным этанолом и тщательно перемешивают. Через 30 мин измеряют оптическую плотность рабочих растворов относительно растворов сравнения (рутин без хлористого алюминия) при длине волны максимума поглощения в интервале 390—420 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 1 см.

При построении калибровочного графика на оси абсцисс откладывают количество рутина в миллиграммах, содержащегося в 25 см³ рабочего раствора, а по оси ординат — максимальное значение оптической плотности в указанном диапазоне.

Калибровочный график должен быть линейным и проходить через начало координат.

9    Проведение измерений

9.1    Подготовка пробы

(1,000 + 0,001) г прополиса взвешивают в конической колбе вместимостью 10 см³ по ГОСТ 25336, добавляют (30,0 + 0,5) см³ 60 %-ного этанола, колбу присоединяют кобратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая для смывания частиц прополиса со стенок. Надосадочную жидкость фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 см³ так, чтобы частицы прополиса не попали на фильтр.

Экстракцию флавоноидов повторяют еще дважды в описанных выше условиях, прибавляя костат-ку по (30,0 + 0,1) см³ 60 %-ного этанола. Фильтраты объединяют, охлаждают до (20 + 3) °С и доводят до метки (100,00 + 0,01) см³ 60 %-ным этанолом.

9.2    Проведение испытания

В две мерные колбы вместимостью 25 см³ дозатором вносят по (5,00 + 0,01) см³ экстракта по 6.7.2.4. В одну колбу (анализируемый раствор) добавляют (4,0 + 0,1) см³ раствора хлористого алюминия по 6.7.2.1, обе колбы доводят до метки 60 %-ным этанолом и тщательно перемешивают. Через 30 мин измеряют оптическую плотность анализируемого раствора относительно раствора сравнения (экстракт без хлористого алюминия) при длине волны максимума поглощения в интервале 390—420 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 1 см.

По калибровочному графику, зная оптическую плотность анализируемого раствора, находят количество рутина в мг в 25 см³ раствора.

10    Обработка и представление результатов испытаний

10.1 Массовую долю флавоноидных соединений (в пересчете на рутин) Х₁, %, вычисляют по формуле

Xi = С-100'100 • /Т7 • 5,    (1)

где С — количество рутина в 25 см³, найденное по калибровочному графику, мг;

3

100 — объем экстракта, см³;

100 — пересчет в проценты, %; т — масса прополиса, взятого для анализа, г;

5 — объем экстракта, взятого для анализа, см³.

10.2    За окончательный результат определения флавоноидных соединений принимают среднеарифметическое значение двух параллельных измерений, полученных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости, рассчитанное по формуле

|Х-Х₂|<Г,    (2)

гдеХ, иХ₂ — результаты двух параллельныхопределений флавоноидных соединений кислот, полученных в условиях повторяемости, %; г_отн — значение предела повторяемости, приведенное в таблице 1,%.

10.3    Расхождение между результатами определения флавоноидных соединений, полученными в двух лабораториях в условиях воспроизводимости, должно соответствовать условию приемлемости по формуле

|Х| — Х₂| < R,    (3)

гдеХ₁ иХ₂ — результаты двухопределений флавоноидных соединений, полученных в условиях воспроизводимости, %;

Я?_отн — значение предела воспроизводимости, приведенное в таблице 1, %.

Таблица 1 —Диапазоны измерений, показатели точности и прецизионности метода определения флавоноидных соединений при доверительной вероятности Р = 0,95

Наименование показателя Диапазон измерений Предел повторяемости 'отн’ % Предел воспроизводимости Roth. % Показатель точности (границы относительной погрешности) + 8, % Массовая доля флавоноидных соединений (в пересчете на рутин) 0,1 до 10 2 8 6

10.4    Форма представления результатов

Результат содержания флавоноидных соединений (в пересчете на рутин) в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде

(Х_ср + А) %, при Р = 0,95,

где Д— абсолютная погрешность результатов измерений, %, вычисляемая по формуле

Д= 5Х_ср • 0,01 или А = 5- /С_ср • 0,01,    (4)

где 5 — относительная погрешность измерений флавоноидных соединений по таблице 1, %.

10.5    Результаты испытаний оформляют протоколом.

4

УДК 638.178:006.354    ОКС    65.140    С52

Ключевые слова: прополис, флавоноидные соединения, в пересчете на рутин, метрологические характеристики

5

Редактор Л.В. Коретникова Технический редактор Е.В. Беспрозванная Корректор Р.А. Ментова Компьютерная верстка И.А. Налейкиной

Сдано в набор 20.06.2014. Подписано в печать 04.07.2014. Формат 60 х 84^. Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 0,93. Уч.-изд. л. 0,60. Тираж 106 экз. Зак. 2509.

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru    info@gostinfo.ru