ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Масла растительные и жиры животные

ПОЛУЧЕНИЕ МЕТИЛОВЫХ ЭФИРОВ ЖИРНЫХ КИСЛОТ

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Временным творческим коллективом, образованным в рамках договора N? 9842002 Е 4075 между АФНОР и ВНИЦСМВ с участием членов Технического комитета по стандартизации ТК 238 «Масла растительные и продукты их переработки*

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 238 «Масла растительные и продукты их переработки*

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 642-ст

3    Настоящий стандарт гармонизирован с международным стандартом ИСО 5509—1978 «Масла растительные и жиры животные. Получение метиловых эфиров жирных кислот*

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт нс может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России

171

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Масла растительные и жиры животные ПОЛУЧЕНИЕ МЕТИЛОВЫХ ЭФИРОВ ЖИРНЫХ КИСЛОТ

Vegetable oils and animal fats. Preparation of methyl esters of fatty acids

Дата введения 2001-01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на растительные масла н животные жиры и устанавливает методы получения метиловых эфиров жирных кислот, предназначенных для целей гаioitoit хроматографии, тонкослойной хроматографии, инфракрасной спектрометрии и других аналитических целей.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 976-81 Маргарин, жиры для кулинарии, кондитерской и хлебопекарной промышленности. Правила приемки и методы испытаний

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3273-75 Натрий металлический технический. Технические условия

ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4233-77 Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4919.1-77 Реактивы и особо чистые веществ:!. Методы приготовления растворов индикаторов

ГОСТ 5471-83 Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 6995-77 Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 8285-91 Жиры животные топленые. Правила приемки и методы испытания

ГОСТ 8677-76 Кальций оксид. Технические условия

ГОСТ 9293-74 Азот газообразный н жидкий. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические

условия

ГОСТ 24363-80 Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные парамет

ры и размеры

ГОСТ 25828-83 Гептан нормальный эталонный. Технические условия ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

11 здание официальное

ГОСТ Р 51486-99

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2—81) Посуд;» лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания

ИСО 661—89* Масла и жиры животные и растительные. Отбор проб ИСО 5555—91* Масла и жиры животные и растительные. Отбор проб

3    Отбор проб

3.1    Отбор проб растительных масел — по ГОСТ 5471, маргариновой продукции — по ГОСТ 976, животных жиров — по ГОСТ 8285.

При экспортно-импортных поставках — по ИСО 5555.

4    Получение метиловых (этиловых) эфиров жирных кислот из триглицеридов переэтерификацией с метанольным (этанольным) раствором метилата (этила-та) натрия

Метод применим для растительных масел, животных жиров и их смесей с кислотным числом нс более 2.0.

Для контроля продукции при экспортно-импортных поставках применяют только метиловые эфиры жирных кислот. Во всех остальных случаях, а также для исследовательских целей применяют метиловые или этиловые эфиры.

4.1    Аппаратура, материалы, реактивы

Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивании 200 г по ГОСТ 24104.

Шпатель.

Пипетка 1(2,3)-1(2)-1(2)-1; 1(2.3)-1(2) по ГОСТ 29227. ГОСТ 29228.

Пробирка П-4-10-14/23 ХС по ГОСТ 25336.

Цилиндр 1-250 или 3-250 по ГОСТ 1770.

Воронка лабораторная В-25-38 или В-36-50 ХС по ГОСТ 25336.

Колба 2-25-2 по ГОСТ 1770.

Колба К-1-1000-29/32 ТС по ГОСТ 25336.

Холодильник ХШ-1-400-29/32 ХС по ГОСТ 25336.

Стаканчик для взвешивания ВС-19/9 по ГОСТ 25336.

Перегонный аппарат, состоящий из: колбы К-1-500-29/32 по ГОСТ 25336; насадки Н-1-29/32-14/23 ТС по ГОСТ 25336; холодильник;» ХПТ-1-400-14/23 ТС по ГОСТ 25336; аллонжа АИО-29/32-14/23-60 или АПК-29/32 по ГОСТ 25336.

Термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 28498 с интервалом температур 0—100 *С и ценой деления 0,5 *С.

Баня водяная.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Натрий металлический по ГОСТ 3273 или метилат натрия.

Окись кальцин по ГОСТ 8677, ч. д. а.

Гексан для хроматографии |1|.

Метлнол-яд по ГОСТ 6995, х. ч. или спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300, абсолютный.

Допускается применение другой аппаратуры и реактивов, по качеству и техническим характеристикам не уступающих перечисленным выше.

4.2    Приготовление растворов

4.2.1 Приготовление абсолютного метанола ( этанола)

В колбу вместимостью 500 ем' взвешивают (30±1) г окиси кальция, добавляют 250 см³ метанола

Действуют до введения в действие ГОСТ Р. разработанных на основе соответствующих ИСО.

173

(этанола) п кипятят с обратным холодильником типа XIII в течение 6—8 ч. Затем метанол перегоняют при температуре 64.7 *С (этанол при температуре 78,3 *С).

4.2.2    Приготовление раствора метилата натрия в метаноле (эт плата натрия в этаноле) молярной концентрации 2 моль/дм³.

Взвешивают 2.7 г метилата натрия (3,4 г этплата натрия) или 1.15 г металлического натрия в стаканчике для взвешивания с точностью до 0.01 г.

В мерную колбу вместимостью 25 ем³ наливают 10—12 ем³ абсолютного метанола (абсолютного этанола) и растворяют в нем метилат натрия или нарезанный маленькими кусочками металлический натрий, который добавляют небольшими порциями. Раствор перемешивают, охлаждают до комнатной температуры и доливают абсолютным метанолом (абсолютным этанолом) до метки. Раствор хранит в холодильнике.

4.2.3    Приготоаленне метиловых (этиловых) эфиров жирных кислот

4.2.3.1    Лабораторную пробу жидкого растительного масла или предварительно расплаатснного твердого растительного маета или животного жира, тщательно перемешивают.

Отобранную от лабораторной пробы навеску растительного масла или животного жира массой 0.1 г помешают в стеклянную пробирку и растворяют в 1.9 см³ гексана.

4.2.3.2    Лабораторную пробу маргариновой продукции массой (100±5) г в стеклянном стаканчике помешают в сушильный шкаф при температуре (40—45 *С) и выдерживают до латного расслоения. Верхний жировой слой сливают, фильтруют через бумажный фильтр и хорошо перемешивают. Вшешивают навеску жировой фазы массой 0.1 г в стеклянную пробирку и растворяют в 1.9 ем' гексана.

4.2.3.3 В гексановый раствор, полученный по 4.2.3.1 или 4.2.3.2, вводят 0.1 см³ раствора метилата натрия в метаноле (этилата натрия в этаноле) малярной концентрации 2 моль/дм³. После интенсивного перемешивания в течение 2 мни реакционную смесь отстаивают 5 мин и фильтруют через бумажный фильтр. При наличии метиловых эфиров (этиловых) эфиров жирных кислот с числом атомов углерода в цепи менее 8 фильтрацию заменяют центрифугированием. Полученный раствор готов к употреблению.

5 Получение метиловых эфиров жирных кислот из триглицеридов перетарификацией с четанольныч раствором гидроокиси калия

Метод применим для растительных масел, животных жиров и их смесей с кислотным числом нс более 2,0.

5.1    Аппаратура, материалы, реактивы

Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Электромагнитная мешалка.

Пробирка П 4-20-14/23 ХС по ГОСТ 25336.

Колб;! 4-50-2 и колба 4-100-2 по ГОСТ 1770.

Колб;» 2-100-1 по ГОСТ 1770.

Цилиндр 1-10 по ГОСТ 1770.

Пипетка 1-1-1-2 по ГОСТ 29227.

Метанол-яд по ГОСТ 6995, х. ч., с последующим получением абсолютного метилового спирта. Калия гидроокись по ГОСТ 24363.

Гептан для хроматографии по ГОСТ 25828.

Гексан для хроматографии |1|.

Мстилпснтадсканоат. выпускаемый промышленностью, или пснтадскановая кислота с содержанием основного компонента нс менее 98 %. метилированная по 6.4.2.

Допускается применение другой аппаратуры и реактивов, по качеству и техническим характеристикам не уступаюшпх перечисленным выше.

5.2    Подготовка испытуемой пробы — по ИСО 661. с нагревом пробы выше точки ее плавления.

5.3    Приготовление растворов

5.3.1 Приготоатснис абсолютного метанола по 4.2.1.

174

ГОСТ Р 51486-99

5.3.2    Приготовление раствора гидроокиси калия в метаноле молярной концентрации 2 моль/дм³.

В мерную колбу вместимостью 100 см³ взвешивают 11,2 г гидроокиси калия и растворяют в 80 см ' метанола с помощью магнитной мешалки. Охлаждают до комнатной температуры и доводят метанолом до метки.

5.3.3    Приготовление раствори сравнения мстилпснтадсканоата в гептане (или гексане)

В мерную колбу вместимостью 50 см' взвешивают (1 ±0.1) г с точностью до 0,001 г мстилпси-т.шсканоата растворяют в небольшом количестве гептана (или гексана) и содержимое колбы доводит до метки гептаном (или гексаном).

5.4 Приготовление метиловых эфиров жирных кислот триглицеридов

5.4.1    В пробирку вместимостью 20 см’ взвешивают навеску продукта массой 1 г и растворяют в 10 см³ гептана (или гексана).

В полученный раствор пипеткой вносят 0,5 см³ мстанольного раствора гидроокиси калин, закрывают пробирку пробкой и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. Затем в течение 5 мин отстаивают полученный раствор для отделения глицерина и декантируют верхний слой, содержащий метиловые эфиры. Раствор готов для определения.

5.4.2    При необходимости работы с внутренним стандартом навеску продукта взвешивают с точностью до 0,001 г. растворяют в 9 см³ гептана (или гексана), добавляют I см³ раствора сравнении и далее проводят испытания по 5.4.

6 Получение метиловых эфиров жирных кислот омылением григлицерилов с последующей этерификацией в кислой среде

Метод применим для растительных масел, животных жиров и их смесей с кислотным числом более 2 и для смесей жирных кислот.

6.1    Аппаратура, материалы, реактивы

Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24 КМ.

Высокоекоростная мешалка, оснащенная нагревателем (например магнитная мешалка). Впускная трубка для азота.

Холодильник ХШ-1-400-29/32 по ГОСТ 25336.

Колба П-1-100-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.

Колба К ГУ-2-1-100-14/23 ТС по ГОСТ 25336.

Колба КН-1-100-14/23 ТХС по ГОСТ 25336.

Кипел км обезжиренные.

Воронка ВД-1(2)-100 ХС по ГОСТ 25336.

Воронка ВК-100 ХС по ГОСТ 25336.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Метанол-яд по ГОСТ 6995, х. ч.. абсолютный.

Гептан для хроматографии по ГОСТ 25828.

Гексан для хроматографии |1|.

Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, х. ч.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233.

Натрий металлический по ГОСТ 3273.

Азот газообразный по ГОСТ 9293 ос. ч.

Кислота серная по ГОСТ 42(М, плотностью 1.84.

Кислота саля пая по ГОСТ 3118, плотностью 1,18.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Метиловый красный, раствор массовой долей 0,1 % в 60 %-ном (объемная даля) этиловом спирте или метиловый оранжевый, приготовленный по ГОСТ 4919.1.

Допускается применение другой аппаратуры и реактивов, по техническим характеристикам нс уступающих перечисленным выше.

6.2    Подготовка испытуемой пробы — по ИСО 661 с нагревом пробы выше точки ее плавления.

6.3    Приготовление растворов

6.3.1 Приготовление абсалютного метанола по 4.2.1

175

6.3.2    Приготовление раствора метилата натрия в метаноле массовой далей 1 %.

I г металлического натрия растворяют в 100 ем' метанола.

6.3.3    Приготовление метанольного раствора хлористого водорода малярной концентрации I моль/дм³.

В колбу с двумя горловинами вместимостью 100 см³. снабженную капельной воронкой, взвешивают 50 г предварительно обезвоженного хлористого натрия, смачивают соляной кислотой и прибавляют по каплям из делительной воронки концентрированную серную кислоту так, чтобы за 20 мин было израсходовано 20 ем³ серной кислоты.

Образующийся газообразный хлористый водород через промывную склянку, наполненную концентрированной серной кислотой, и через капилляр вводят в колбу с двумя горловинами, в которую помещено 100 см³ метилового спирта. Насыщение метилового спирта хлористым водородом проводят до увеличения первоначальной массы на 4 %. Для получения большего количества реактива дозировку реагентов соответственно пропорционально увеличивают. Полученный реактив хранят 2—3 мсс в плотно закрытой стеклянной таре.

Вместо мстанольного раствора хлористого водорода можно применять мстанольный раствор серной кислоты при дальнейшей этерификации нс менее 20 мин. В связи с тем, что в процессе реакции выделяется сульфат натрия, затрудняющий нормальное кипение, реакцию проводят при постоянном перемешивании магнитной мешалкой.

6.4 Приготовление метиловых эфиров жирных кислот из триглицеридов

6.4.1    В колбу вместимостью 100 см³ взвешивают навеску продукта массой 1 г и добавляют 10 см³ раствора метилата натрия в метаноле. Присоединяют к колбе обратный холодильник и нагревают до кипения на водяной бане. Раствор должен быть прозрачным. Для масел, растворимых в мстанатс (например касторового), прозрачность нс является кр1ггсрисм для оценки законченности реакции. Реакция протекает нс более 15 мин. Затем в катбу добавляют 13 см³ мстанатьного раствора хлористого водорода и кипятят в течение 10 мин. После чего катбу охлаждают под струей воды и добавляют в нее 25 см³ дистиллированной воды. Содержимое колбы переносят в делительную воронку вместимостью 100 ем³ и экстрагируют гептаном (ши гексаном) 2 раза по 10 см³. Объединенные экстракты промывают дистиллированной водой порциями по 7 см³ до полного удаления кислоты по метиловому оранжевому (или метиловому красному). Экстракт сушат фильтрованием через слой безводного сульфата натрия и используют для испытаний.

В присутствии жирных кислот, содержащих более двух двойных связей воздух, находящийся в мстанольном растворе н в колбе, рекомендуется удалить током азота. Для этого азот пропускают через раствор в течение 1—2 мин и поддерживают ток азота в верхней части обратного холодильника во время последующего омыления.

В случае предположения в испытуемой пробе значительного котнчсства нсомылясмых веществ раствор, полученный после омылении метилатом натрия, разбавляют водой и экстрагируют нсомы-лнемые вещества диэтиловым эфиром, гексаном или петралейным эфиром, подкисляют и отделяют жирные кислоты. Затем получают метиловые эфиры по 6.4.2.

Для инфракрасной спектрометрии важно максимально полное удаление растворителя.

Для газожидкостной хроматографии и при наличии в жирных кислотах восьми и менее атомов углерода растворитель удалять нс следует.

6.4.2    В испытуемых пробах, состоящих из смесей жирных кислот, этап омыления нс требуется.

Навеску жирных кислот массой (1±0,1) г заливают 13 см³ мстанольного раствора хлористого

водорода и далее по 6.4.1.

В присутствии жирных кислот, содержащих более двух двойных связей, воздух, находящийся в мстанольном растворе и колбе, рекомендуется удалить током азота. Для этого азот пропускают через раствор в течение 1—2 мин и поддерживают ток азота в верхней части обратного холодильника.

7 Требовании к выполнению определении

7.1    При работе с новой партией |>сагснтов и растворителей необходимо проводить контрольное получение метилового эфира чистой стеариновой кислоты. Если при последующем его хроматографировании появятся посторонние «пики*, от данного реагента следует отказаться.

7.2    При отсутствии нужного количества лабораторной пробы масса навески продукта может быть уменьшена до 10 мг и менее, с пропорциональным уменьшением количества реагентов и размеров лабораторной посуды.

176

ГОСТ Р 51486-99

8    Хранение метиловых (этиловых) эфиров жирных кислот

8.1    Готовые гагтановыс (гексановые) растворы метиловых эфиров жирных кислот хранят в холодильнике нс более 2 сут.

При длительном хранении растворов их необходимо предохранить путем добавления в раствор антиокислителя концентрацией, нс мешающей дальнейшему ходу испытаний, например 0.05 г/дм³ раствора ВНТ (2.6-дн-трстбут1м-4-мел1лфенол).

Смеси метиловых эфиров, содержащие эфиры масляной кислоты, хранят только в герметичных ампулах. Следует принимать меры предосторожности во избежание потерь метиловых эфиров во время заполнении и запаивания ампул.

9    Требовании техники безопасности

9.1    Металлический натрий сильно окисляется на воздухе, энергично реагирует с водой, что может вызвать взрыв. Металлический натрий хранят в банках под слоем керосина, вазелинового масла или толуола.

9.2    Работу с металлическим натрием проводят следующим образом. Вначале готовят несколько листов фильтровальной бумаги, затем пинцетом его достают из банки, быстро обжимают фильтровальной бумагой, чистым сухим ножом обрезают окисленные края и отрезают кусок нужного размера. При |xi6otc используют индивидуальные средства защиты. Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией.

ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)

Библишрафия

|1| ТУ 6-09-3375-78 Гексан

ОКС 67.200.10    Н69    ОКСТУ    9109

Ключевые слова: масла растительные, жиры животные, метиловые эфиры жирных кислот, жирные кислоты, газохроматографический анализ

177