ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ И КОРМА

Экспресс-метод определения сырьевого состава (молекулярный)

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2011

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0 — 2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН ООО «Компания «Биоком» при участии ГНУ ВНИИ мясной промышленности им. В. М. Горбатова РАСХН

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 мая 2007 г № 104-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июнь 2011 г.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования —на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

©Стандартинформ, 2007 ©СТАНДАРТИНФОРМ. 2011

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

216

Введение

Настоящий стандарт разработан в соответствии с Федеральным законом «О техническом регулировании» в целях формирования нормативной базы для соблюдения требований законопроектов—специальных технических регламентов о безопасности пищевых продуктов и достоверности информации потребителя о фактическом составе готового продукта.

Настоящий стандарт допускается к применению при контроле кормов, сырья и продуктов питания для выявления фальсификаций сырья, пищевой продукции и детекции несанкционированных примесей в кормах.

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, продовольственное сырье растительного. животного происхождения, корма и устанавливает экспресс-метод качественного определения видовой принадлежности содержащихся в них мясных и растительных ингредиентов.

Стандарт предназначен для ускоренной идентификации видоспецифичной ДНК крупного рогатого скота (Bos taurus), свиньи (Sus scrofa), курицы (Gallus gallus), сои (Glycine max), кукурузы (Zea mays), картофеля (Solanum tuberosum) и др. в составе кормов, сырья, полуфабрикатов, готовых продуктов питания методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Метод оптимален для определения видовой принадлежности растительных и животных компонентов в составе кормов, сырья, пищевых продуктов, в том числе подвергавшихся термической обработке.

218

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ И КОРМА Экспресс-метод определения сырьевого состава (молекулярный)

Foodstuffs and feeds. Rapid method of identification of raw composition (molecular)

Дата введения — 2008—06—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на экспресс-метод качественного определения видовой принадлежности мясных и растительных ингредиентов, содержащихся в кормах, пищевых продуктах, продовольственном сырье растительного, животного происхождения, в том числе подвергавшихся термической обработке.

Стандарт предназначен для ускоренной идентификации видоспецифичной ДНК крупного рогатого скота (Bos taurus), свиньи (Sus scrofa), курицы (Gallus gallus), сои (Glycine max), кукурузы (Zea mays), картофеля (Solanum tuberosum) и др. в составе кормов, сырья на всех этапах его переработки, транспортирования, хранения, а также полуфабрикатов, готовых продуктов питания методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005 — 88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 7631-2008 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Методы определения органолептических и физических показателей

ГОСТ 9792-73 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

* На территории Российской Федерации с 1 января 2011 г. действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.

Издание официальное

ГОСТ 10852-86 Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 12430-66 Продукция сельскохозяйственная. Методы отбора проб при карантинном досмотре и экспертиз

ГОСТ21241—89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26312.1-84 Крупа. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия

ГОСТ 27668-88 Мука и отруби. Приемка и методы отбора проб

ГОСТ 31339-2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора

проб

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущею года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    полимеразная цепная реакция; ПЦР: Циклический ферментативный процесс, результатом которого является получение многочисленных копий определенного участка молекулы ДНК.

3.2    полимеразная цепная реакция в режиме реального времени; Полимеразная цепная реакция. проводимая по специальной технологии, которая позволяет регистрировать накопление продуктов ПЦР в процессе амплификации.

3.3    амплификация: Образование дополнительных копий хромосомных последовательностей дезоксирибонуклеиновой кислоты ДНК.

3.4    видоспецифичная ДНК: Дезоксирибонуклеиновая кислота, однозначно принадлежащая определенному виду растений или животных.

3.5    биологический реагент: Многокомпонентная смесь химических реактивов, находящихся в определенных соотношениях, применяемая для исследования биологических объектов.

3.6    фальсификационное сырье, продукт: Сырье, продукт, в которых выявлены несоответствия.

3.7    несоответствия: Наличие отклонений от нормативного документа на данный продукт (сырье, ингредиент и т.п.) в показателях качества и безопасности, а также сырьевого и компонентного состава.

4    Оборудование, приборы и наборы реагентов

Допускается применение приборов и оборудования с техническими и средств измерений с метрологическими характеристиками, а также наборов реагентов, по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.

4.1    Спирт этиловый 95%-ный, ректификованный по ГОСТ Р 51652.

4.2    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

4.3    Дезрастворы, вызывающие деградацию ДНК.

4.4    Дозаторы автоматические одноканальные с переменным объемом: 0,5— 10,0 мкп (шаг 0,1 мкл, точность ± 10,0 % — 2,5 %); 5.0 — 50.0 мкл (шаг 0,5 мкл, точность ± 5.0 % — 2,0 %); 20,0 — 200,0 мкл (шаг

1,0 мкл, точность ± 2,0 % — 1,5 %); 100 — 1000 мкл (шаг 5,0 мкл, точность ± 1,5 % — 1,0 %).

4.5    Источник напряжения для электрофореза, диапазон регулируемого напряжения — до 300 В.

4.6    Колбы стеклянные мерные конические вместимостью 500—1000 см³ по ГОСТ 25336.

4.7    Контейнеры для сброса наконечников и использованных пробирок.

4.8    Микрогомогенизаторы дюралюминиевые с защитным оксидным слоем под конические микропробирки вместимостью 1,5 см³.

4.9    Микропробирки полипропиленовые конические объемом 1.5 см³ с крышкой.

4.10    Микроцентрифуга-встряхиватель со скоростью вращения до 2000 об/мин.

4.11    Наконечники для автоматических одноканальных дозаторов в штативах.

ГОСТ P 52723—2007

4.12    Термостат твердотельный с охлаждением проб для микропробирок вместимостью 0.5 и 1.5 см³.

4.13    Персональный компьютер.

4.14    Перчатки резиновые или латексные неопудренные.

4.15    Пинцеты медицинские по ГОСТ 21241.

4.16    Прибор для горизонтального электрофореза.

4.17    Пробирки пластиковые вместимостью 15 см³ с крышкой.

4.18    Амплификатор (термоциклер) для ПЦР в реальном времени.

4.19    Программируемый термостат (амплификатор) для ПЦР под микропробирки вместимостью 0.2 или 0.5 см³ со средней скоростью нагрева/охлаждения 0.5 - 2,5 °С/с и диапазоном задаваемых температур от 20 ^вС до 99 *С.

4.20    СВЧ-печь объемом не менее 17 л, мощностью не менее 600 Вт.

4.21    Система для документирования гелей с разрешением не ниже 2 млн пикселей в цветном режиме.

4.22    Скальпели хирургические.

4.23    Ступки фарфоровые с пестиками.

4.24    Твердотельный термостат для микропробирок вместимостью 1.5 см³, диапазоном рабочих температур от 10°С до 120 ^вС.

4.25    УФ-бокс.

4.26    Холодильники бытовые электрические с морозильной камерой, обеспечивающей температуру минус 18 *С по ГОСТ 26678.

4.27    Центрифуга для микропробирок вместимостью 1.5 см³ со скоростью вращения не менее 16000 об/мин.

4.28    Цилиндры стеклянные мерные лабораторные на 50 см³ (или 100 см³) и 500 см³ по ГОСТ 1770.

4.29    Шпатели одноразовые.

4.30    Штативы для одноканальных автоматических дозаторов на пять мест.

4.31    Штативы под микропробирки вместимостью 0.2; 0,5 и 1.5 см³.

4.32    Штативы-контейнеры для хранения образцов в микропробирках вместимостью 1,5 см³.

4.33    Набор реагентов для выделения ДНК.

Лизирующий буфер (далее — ЛБ):    5.25М    гуанидинтиоцианата.    50    мМ    трис-НС1    (pH 6,4),

20 мМ ЭДТАх№₂,1.3 % Тритона Х-100.

Отмывочный буфер № 1 (далее — ОБ 1), концентрат: 76 % этанола, 0.2 М ацетата Na.

Отмывочный буфер № 2 (далее — ОБ 2), концентрат: 76 % этанола. 10 мМ ацетата Na.

Сорбент: 25 % частиц Si0₂ размером от 20 до 50 мкм в 50 мМ трис-НС1 (pH 6.4).

Буфер элюирующий (далее — ТЕ-буфер): 10 мМ трис-HCI, 1 мМ ЭДТА (pH 8,0).

4.34    Наборы реагентов для амплификации (ПЦР).

4.34.1 Наборы реагентов для амплификации — ПЦР¹*:

Пробирки амплификационные с лиофильно высушенной амплификационной смесью состава 80 мМ трис-HCI (pH 8.0). 0,1 % Тритона Х-100.24 мМ (NHJ^SO.,. 0.5 мМ ЭДТА. дезоксинуклеозидтрифосфа-тов дАТФ. дТТФ. дГТФ, дСТФ по 500 мМ каждого. OligoTaq ДНК-полимеразы 0.1 ед/мкл. 0.04 % водорастворимого красителя для электрофореза ксиленцианола, 0,16 % D-глюкозы, 1,6 % инулина, 8 % D-манни-тола.

ПЦР-растворитель.

Смесь праймеров (олигонуклеотидов) для амплификации определяемых нуклеотидных последовательностей генома крупного рогатого скота:

F 5 ТGAGGACАААТАТСАТТCTGAGG 3'

R 5' GAGCAAGAATTAGGATAGAGAAG 3' или генома свиньи:

F 5' GACCTССС AGCTСС АТ С АААСАТ СТCAT CAT GAT GAAA 3'

R 5' GCTGATAGTAGATTTGTGATGACCGTA 3', или генома курицы:

F 5^; ТСАСАТCGGACGAGGCCTA 3'

R5' GGAATGGGGTGAGTATGAGAGTT3', или генома сои:

F5 GTGCTACTGACCAGCAAGGCAAACTСAGCА 3'

R5‘ GAGGGTTTTGGGGTGCCGTTTTCGTCAAC 3',

¹¹ Применяют при проведении этапа амплификации по методике, описанной в 7.1.

221

или генома картофеля:

F 5' GATGGTGCTGTTGCTACTGTTGATGАТСС 3'

R 5' AACATCCATCGTGCAGTACCCCATTTAGC 3". или генома кукурузы:

F 5' TTCTCGTCGTGTGCCTGGCTCTGTCAG 3'

R5' CGT ССАТCATССТ CATСТGCT GCT GCTGGC 3'.

Контрольный образец (К+), содержащий ДНК выявляемого вида животного (крупного рогатого скота, свиньи, курицы) или растения (сои. кукурузы, картофеля).

Масло минеральное.

4.34.2    Наборы реагентов для амплификации — ПЦР¹*:

Пробирки амплификационные с лиофильно высушенной амплификационной смесью состава по4.34.1, содержащей праймеры (олигонуклеотиды) для амплификации определяемых нуклеотидных последовательностей генома крупного рогатого скота:

F 5' ТGAGGACАААТАТCATTCTGAGG 3'

R 5' GAGCAAGAATTAGGATAGAGAAG 3' или генома свиньи:

F 5' G АССТ CCCAGCTCC АТС АААС АТ СТCATCAT GAT G AAA 3'

R 5' GCTGATAGTAGAT TTGTGATGACCGTA 3', или генома курицы:

F 5' TСACATCGGACGAGGCCTA 3'

R 5^; GGAATGGGGTGAGTATGAGAGTT 3', или генома сои:

F5' GT GCTACT GACC AGC AAGGCAAACT C AGC A 3'

R 5’ GAGGGTTTTGGGGTGCCGTTTTCGTCAAC 3'. или генома картофеля:

F 5’ G ATGGT GCT GTT GCTACT GTT GAT GAT CC 3'

R 5' AACATCCATCGT GCAGTACCCCATTTAGC 3, или генома кукурузы:

F 5' TTCTCGTCGTGTGCCTGGCTCTGTCAG 3'

R5' CGT CCATCATCCT CATCTGCT GCT GCT GGC 3'.

ПЦР-растворитель.

Контрольный образец (K+), содержащий ДНК выявляемого вида животного (крупного рогатого скота, свиньи, курицы) или растения (сои. кукурузы, картофеля).

Контрольный образец (далее — К-), не содержащий ДНК выявляемого вида животного (крупного рогатого скота, свиньи, курицы) или растения (сои, кукурузы, картофеля).

Масло минеральное.

4.34.3    Наборы реагентов для ПЦР в реальном времени²¹:

Пробирки амплификационные с лиофильно высушенной амплификационной смесью состава 80 мМ трис-НС1 (pH 8,0), 0,1% Тритона Х-100,24 мМ (NH₄)_?S0₄,0,5 мМ ЭДТА, дезоксинуклеозидтрифосфа-тов дАТФ, дТТФ. дГТФ. дСТФ по 500 мМ каждого, OligoTaq ДНК-полимеразы 0,1 ед/мкл, 0,16 % D-глюкозы, 1.6 % инулина, 8 % D-маннитола для проведения ПЦР в режиме реального времени.

ПЦР-растворитель, содержащий интеркалирующий краситель SYBR Green.

Смесь праймеров (олигонуклеотидов) для амплификации определяемых нуклеотидных последовательностей генома крупного рогатого скота:

F 5' ТGAGGACAAATATCATTCTGAGG 3'

R 5' GAGCAAGAATTAGGATAGAGAAG 3' или генома свиньи:

F 5' G АССТ CCCAGCTССАТСАААСАТ СТCATCAT GAT GAAA 3'

R5' GCT GATAGTAGATTT GT GAT GACCGTA 3', или генома курицы:

F 5' TCACATCGGACGAGGCCTA 3'

R 5' GGAAT GGGGT GAGTAT GAG AGTT 3',

’* Применяют при проведении этапа амплификации по методике, описанной в подразделе 7.2. Я Применяют при проведении этапа амплификации по методике, описанной в подразделе 7.3.

222

ГОСТ P 52723—2007

или генома сои:

F5' GTGCTACTGACCAGCAAGGCAAACTСAGCА 3'

R 5’ GAGGGTTTTGGGGTGCCGTTTTCGTСААС 3'. или генома картофеля:

F 5' GATGGTGCTGTTGCTACTGTTGATGАТСС 3^;

R 5' AACATССATCGTGCAGTACCCCATTTAGC 3'. или генома кукурузы:

F5' TTCTCGTCGTGTGCCTGGCTСТGTCAG 3'

R 5’ CGTССАТCATССТCATСТGCTGCTGOTGGC 3'.

Контрольный образец (К+), содержащий ДНК выявляемого вида животного (крупного рогатого скота, свиньи, курицы) или растения (сои, кукурузы, картофеля).

4.34.4 Наборы реагентов для ПЦР в реальном времени¹*:

Пробирки амплификационные с лиофильно высушенной амплификационной смесью состава по4.34.3 для проведения ПЦР в режиме реального времени.

ПЦР-растворитель, содержащий фоновый краситель ROX.

Смесь праймеров (олигонуклеотидов) для амплификации определяемых нуклеотидных последовательностей генома крупного рогатого скота:

F 5 GCCTTСТСТАТССТААТТСТТGOTСТААТС З¹ R 5 AATAGGTCTGCTACTAGGGCTCAGAATA З¹ или генома свиньи:

F 5' GGCTTTT CCGTCGACAAAGC 3 R 5' СТ GCGAGGGCGGTAAT GAT 3'.

Контрольный образец (далее — К+), содержащий ДНК выявляемого вида животного (крупного рогатого скота. свиньи).

4.35 Набор реагентов для детекции продуктов амплификации методом электрофореза в агарозном

геле:

Буфер для электрофореза (трис-ЭДТА-боратный буфер, сухая смесь).

Агароза для электрофореза.

Бромистый этидий, х.ч.

5 Отбор проб, их транспортирование и хранение, подготовка к анализу

Метод определения сырьевого состава основан на выявлении при помощи ПЦР фрагментов видоспецифичной ДНК. присутствие которых в анализируемом материале однозначно свидетельствует о наличии в нем компонентов тканей растений или животных определенного вида.

5.1    Отбор проб

Отбор проб проводят по национальным стандартам, устанавливающим порядок отбора проб для однородных групп пищевой продукции и кормов — ГОСТ 7631, ГОСТ 9792, ГОСТ 10852, ГОСТ 12430, ГОСТ 13341, ГОСТ 26312.1, ГОСТ 26313, ГОСТ 27668.

Если масса (объем) продукта не установлена в нормативных или технических документах на продукт конкретного вида, то от каждой упаковочной единицы, попавшей в выборку, отбирают:

-    не менее 1 шт. — от продукции в потребительской таре в количестве по 5.3.1,5.3.2, 5.3.3:

-    от 50 до 1000 г (см³) — от продукции в транспортной таре (кусковой, жидкой, пастообразной, сыпучей и смешанной консистенции).

Для исследования пищевых продуктов животного, растительного происхождения, кормов и продовольственного сырья методом ПЦР отбор образцов для исследования проводят таким образом, чтобы не происходила перекрестная контаминация (загрязнение одного образца другим).

Для этого отбор проб проводят в перчатках, а инструменты, применяемые для отбора и измельчения материала, используют однократно или обрабатывают моющими средствами и стерилизуют в пламени спиртовки или газовой горелки при переходе от пробы к пробе. Отбор проб проводят в чистую стеклянную или пластиковую посуду или одноразовые пластиковые пакеты.

5.2    Транспортирование и хранение

Каждую отобранную пробу маркируют этикетками с указанием наименования продукта, предприятия-изготовителя, номера партии, даты отбора проб, цели исследования, подписей лиц. отбиравших пробу.

Применяют при проведении этапа амплификации по методике, описанной в подразделе 7.4.

223

Отобранные пробы, предназначенные для исследования вне предприятия-изготовителя, пломбируют и опечатывают печатью организации, отвечающей за контролируемую продукцию, и транспортируют в лабораторию.

Транспортирование образцов осуществляют при температуре, рекомендованной для их хранения. Длительность транспортирования не должна превышать срока годности исследуемого материала.

Образцы исследуемого материала хранят в течение 1 мес (при необходимости повторного анализа) согласно условиям, указанным производителем.

5.3 Подготовка проб к анализу (первичная обработка)

Подготовку проб проводят в условиях ПЦР-лаборатории в зоне первичной обработки материала в соответствии с приложением А (см. А.1).

5.3.1    При исследовании жидких и полужидких материалов (молочных продуктов, соусов, паст, майонезов и пр.) содержимое каждой из доставленных упаковок тщательно перемешивают при помощи одноразового шпателя. Затем отбирают по 10ОО мкл содержимого, переносят в одноразовую пластиковую пробирку вместимостью 15 см³ и тщательно перемешивают, формируя объединенную пробу. В одноразовую микропробирку вместимостью 1,5 см³ отбирают 1 см³ объединенной пробы, таким образом создавая среднюю пробу, которую маркируют. С целью получения лабораторной пробы при помощи автоматического дозатора отбирают 100—150 мкл материала от средней пробы и помещают его в одноразовую микропробирку вместимостью 1.5 см³, маркируют и используют для выделения ДНК.

5.3.2    При исследовании сухих сыпучих материалов (комбикормов, мясо-костной муки, рыбной муки, сухих кормов для домашних, промысловых и сельскохозяйственных животных, яичного порошка, муки, белкового изолята. пищевых белковых добавок и пр.) от доставленной пробы отбирают не менее 10 навесок (по 5—10 г каждая) в одноразовый полиэтиленовый пакет размером 20x30 см и перемешивают при помощи одноразового шпателя, формируя объединенную пробу (50— 100 г). Затем в одноразовую, герметично закрывающуюся пробирку или контейнер отбирают около 10 г объединенной пробы, создавая среднюю пробу, которую маркируют. Если полученная средняя проба не является гомогенной, то перед началом исследования ее помещают в фарфоровую ступку и растирают фарфоровым пестиком до однородного мелкодисперсного, гомогенного состояния. С целью получения лабораторной пробы для выделения ДНК при помощи одноразового шпателя отбирают от гомогенной средней пробы 75 — 100 мкл материала по насыпному объему, помещают его в одноразовую микропробирку вместимостью 1.5 см³, маркируют и используют для выделения ДНК.

5.3.3    При исследовании материалов плотной консистенции (мяса в блоках, мяса механической дооб-валки. фаршевых изделий, консервов и консервированных кормов, колбасы, сыра, соевого шрота, фуражной кукурузы и пр.) от поступившего на исследование образца (потребительской упаковки) отбирают не менее 10 навесок (по 5—10 г каждая) и измельчают в фарфоровой ступке. Измельченный материал помещают в одноразовый полиэтиленовый пакет размером 20x30 см. перемешивают при помощи одноразового шпателя, формируя объединенную пробу (50 — 100 г). Затем в одноразовую, герметично закрывающуюся пробирку или контейнер отбирают около 10 г объединенной пробы, формируя среднюю пробу, которую маркируют. Перед началом исследования пробу измельчают при помощи скальпеля (ножниц), помещают в фарфоровую ступку и растирают фарфоровым пестиком до однородного мелкодисперсного, гомогенного состояния. С целью получения лабораторной пробы для выделения ДНК при помощи одноразового шпателя отбирают от гомогенной средней пробы 100 — 150 мкл материала по насыпному объему, который помещают в одноразовую микропробирку вместимостью 1,5 см³, маркируют и используют для выделения ДНК.

5.3.4    Микропробирки с лабораторными пробами маркируют номером, нанесенным на пробирки (контейнеры) со средними пробами. После получения лабораторных проб пробирки (контейнеры) с оставшимися средними пробами помещают на хранение в течение 1 мес в условиях, указанных производителем исследуемого материала.

6 Выделение ДНК

Сущность методики заключается в том. что вся ДНК. полученная в результате клеточного лизиса, связывается с сорбентом и в таком состоянии проходит стадии очистки, а затем при помощи элюции переводится в раствор.

6.1    Подготовка набора реагентов для выделения ДНК

6.1.1    Содержимое флаконов с ОБ 1 и ОБ 2 переносят в мерные цилиндры и доводят объем до 50 см³ этиловым спиртом (95 %-ный. ректификат). Затем переливают в те же флаконы и перемешивают, переворачивая плотно закрытые флаконы 5-6 раз.

6.1.2    Хранят рабочие растворы ОБ 1 и ОБ 2 в плотно закрытых флаконах при температуре 4 °С в течение 1 года.

6